Определение амидофоса в молоке и мясе тонкослойной хроматографией

Реактивы и растворы

Ацетон х.ч.

Петролейный эфир ( 40-70 °С) хч

Хлороформ х.ч.

Бутанол х.ч.

Соляная кислота х.ч.

Едкий натр х.ч.

Паранитроанилин, перекристаллизованный из горячей воды.

Амидофос х.ч.

Окись алюминия для хроматографии II степени активности.

Силикагель КСК.

Гипс чистый медицинский.

Приборы и посуда

Хроматографическая камера (герметично закрывающийся стеклянный сосуд).

Микроизмельчитель тканей РТ-2.

Центрифуга (8 тыс. об/мин).

Стеклянный или металлический валик с ограничительными кольцами для нанесения слоя окиси алюминия с гипсом толщиной 0,2 мм. Станок для нанесения сорбента на пластинки.

Фарфоровая ступка и пестик.

Сита 100 и 150 меш.

Стеклянные пластинки 13х18 см или другого размера.

Бюксы на 100 мл.

Колбы на 150 и 500 мл.

Делительные воронки на 100-200 мл.

Микропипетки.

Воронки конические.

Пульверизаторы.

Приготовление пластинок

Для приготовления пластинок 90 г окиси алюминия II степени активности тщательно смешивают с 10 г гипса и просеивают через сито 150 меш. На матовую поверхность пластинки насыпают сорбент и разравнивают валиком, чтобы получился слой толщиной 0,2 мм. Для закрепления нанесенного слоя пластинки выдерживают 1 мин над водяным паром. Затем пластинки опрыскивают из пульверизатора дистиллированной водой до полного насыщения сорбента, что отчетливо видно по образованию глянца. Пластинки сушат 20 ч в горизонтальном положении при комнатной температуре (20-22 °С).

Для приготовления хроматографических пластинок со слоем силикагеля и гипса 60 г просеянного через сито 100 меш силикагеля смешивают с 3,5 г гипса. В смесь наливают 180 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Две чайных ложки гомогенной массы распределяют по поверхности пластинки ровным слоем. Пластинки сушат в горизонтальном положении при комнатной температуре 24 ч.

Ход анализа. Мясо. Пробу массой 20 г заливают 10 мл дистиллированной воды и гомогенизируют в микроизмельчителе 1-2 мин при 1000 об/мин. Гомогенат заливают 20 мл ацетона, оставляют на час при комнатной температуре и центрифугируют 20 мин при 8 тыс. об/мин. Водно-ацетоновый слой отфильтровывают через смоченный хлороформом бумажный фильтр в делительную воронку, добавляют 3 мл насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, приливают 50 мл хлороформа и снова перемешивают легким покачиванием воронки. После расслоения нижний ацетоно-хлороформный слой сливают и фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу или химический стакан вместимостью 150 мл. Затем в делительную воронку вносят еще 50 мл хлороформа и снова сливают и фильтруют нижний ацетонохлороформный слой. Слитые нижние слои объединяют. В экстракт вносят 10 г безводного сульфата натрия, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр в химический стакан. Экстракт выпаривают досуха на водяной бане или в ротационном испарителе.

Молоко. К пробе (20 мл) добавляют 20 мл ацетона. Дальнейший ход экстракции такой же, как и для мяса. После выпаривания экстракта в сосуд наливают 0,5 мл ацетона, ополаскивают сосуд и наносят ацетон на хроматографическую пластинку на расстоянии 2 см от нижнего края. Эту процедуру повторяют 3-4 раза, причем каждый раз ацетон с растворенным в нем остатком препарата наносят в одну точку на хроматографической пластинке.

Пластинки помещают для разгонки в хроматографическую камеру с системой ацетон - петролейный эфир или ацетон - -гексан (1:1), предварительно выдержанную в закрытом состоянии с растворителями 60 мин.

После подъема фронта растворителей на высоту 10 см от линии старта пластинку вынимают из камеры и подсушивают 10-15 мин на воздухе.

Для проявления хроматограммы пластинку опрыскивают из пульверизатора I реактивом до слабого насыщения, подсушивают 10-15 мин на воздухе, подогревают над плиткой или газовой горелкой и через 10-15 мин опрыскивают II реактивом. При наличии амидофоса в пробах на хроматограмме проявляются пятна розового цвета с от 0,56 до 0,60.

Количественное определение амидофоса в исследуемом материале проводят путем сравнения интенсивности окраски и размеров пятен со шкалой стандартов. Для приготовления стандартной шкалы растворы амидофоса в ацетоне 1:20000, 1:10000 и 1:5000, соответствующие 5, 10 и 20 мкг препарата в 0,1 мл раствора, наносят на хроматографическую пластинку, разгоняют и проявляют. Размеры пятен измеряют или сравнивают визуально.

Расчет. При вычислении количества амидофоса учитывают, что из молока и мяса экстрагируется 50% препарата. Расчет проводят по формуле:

,

     
где - количество препарата в 1 кг исследуемого продукта, мг/кг;

2 - коэффициент экстракции;

- количество препарата, выделенное из пробы, мкг;

- масса пробы, г.

Сборник методических документов,
необходимых для обеспечения применения
Федерального закона от 12.06.08 N 88-ФЗ
"Технический регламент на молоко
и молочную продукцию". Часть 7. -
М.: Федеральный центр гигиены
и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009