Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД, линдана и ТХМ-3 в молоке и молочных продуктах газожидкостной хроматографией

Реактивы и растворы

Ацетон х.ч.

Хлороформ х.ч.

Смесь бензола с гексаном (3:8).

Насыщенный раствор поваренной соли.

Стекловата.

5%-ный раствор оксалата калия.

-Гексан х.ч.

Силикагель АСК.

Стандартный раствор пестицидов в гексане (0,2 мкг/мл линдана, 0,5 мкг/мл ТХМ-3, 0,4 мкг/мл ДДЭ, 0,5 мкг/мл ДДД и 0,5 мкг/мл ДДТ для никелевого источника). Концентрация пестицидов в стандартном растворе для работы с тритиевым источником должна быть на 1-2 порядка ниже.

Все органические растворители должны быть свежеперегнаны.

Жидкая фаза - QF-1, SE-30 или ПФМС-4. Газ-носитель - азот особой очистки (кислорода не более 0,003%). Используют колонку с 2,5% SE-30 или QF-1 или с 5% ПФМС-4 на хромосорбе W или G или на хроматоне. Готовую колонку необходимо прогреть в термостате в токе газаносителя для удаления летучих соединений. Для этого колонку помещают в колоночный термостат, присоединяют один конец к блоку ввода пробы. Другой конец не присоединяют к детектору, чтобы не засорить его. Устанавливают температуру термостата на 25-30 °С выше рабочей температуры и продувают колонку газом-носителем 24-48 ч при скорости 50-60 мл/мин.

Приборы и посуда

Хроматограф с детектором по захвату электронов.

Микрошприц на 10 мкл.

Хроматографическая колонка длиной 390 мм (внутренний диаметр 18 мм).

Колбы мерные вместимостью 100 мл.

Делительные воронки на 150, 250-300 мл.

Цилиндры мерные на 100 мл.

Круглодонные колбы на 250-500 мл со шлифом.

Баня водяная.

Ротационный испаритель ИР-1.

Ход анализа. Молоко (кефир, простокваша, кумыс и другие цельномолочные продукты). 25 мл продукта помещают в делительную воронку на 300 мл, приливают по 5 мл оксалата калия и насыщенного раствора поваренной соли, перемешивают, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 2 мин. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю фазу отбрасывают, а нижнюю выливают в круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30 мл -гексана.

Сгущенное молоко , 10-20%-ные сливки. К 10 г продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора NaCl и смесь выливают в делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона, встряхивают 2 мин, приливают 60 мл хлороформа, встряхивают 2-3 мин и оставляют до полного разделения фаз. Далее, как описано для молока.

Сгущенные молочные продукты. 10 г продукта помещают в стаканчик, заливают 10 мл воды с температурой 45-50 °С, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл, добавляют 5 мл раствора оксалата калия. Содержимое воронки перемешивают, приливают 80 мл ацетона и энергично встряхивают 2-3 мин, добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5-7 мин. После разделения фаз (обычно не более 5 мин) нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворители отгоняют, а остаток растворяют в 30 мл петролейного эфира.

Сухие молочные продукты. 3 г продукта (2 г сухих сливок) отвешивают в стаканчик, приливают 15 мл дистиллированной воды с температурой 40-45 °С, размешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 250-300 мл, приливают по 5 мл 5%-го раствора оксалата калия и насыщенного раствора поваренной соли. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3-5 мин, приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Оставляют до полного разделения фаз (3-5 мин). Нижнюю фазу сливают в колбу, растворители отгоняют, остаток смывают 30 мл -гексана.

Масло, молочный жир. 2 г продукта отвешивают в стаканчик, подогревают до 40 °С и растворяют в 30 мл -гексана.

30-40%-ные сливки, сметана. 5 г продукта энергично встряхивают с 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и 40 мл ацетона. Приливают 70 мл хлороформа. Смесь встряхивают и оставляют до разделения фаз. Далее, как описано для молока.

Творог, сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и переносят в делительную воронку на 250 мл. Прибавляют 80 мл ацетона, встряхивают 2 мин, добавляют 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Смесь оставляют до разделения фаз, нижнюю фазу используют для анализа.

Очистка экстрактов от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки помещают стекловату, затем насыпают в нее 70 мл силикагеля АСК и уплотняют его постукиванием. Колонку промывают 50 мл гексана (прошедший сквозь колонку растворитель отбрасывают). На колонку наносят 30 мл полученного из молока или молочных продуктов экстракта. После впитывания экстракта в сорбент пестициды элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном (3:8) порциями по 25-30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу вместимостью 250-300 мл со шлифом. Через 10 мин после впитывания последней порции растворителя необходимо отжать сорбент с помощью резиновой груши.

После очистки растворитель отгоняют на ротационном испарителе ИР-1 или с капилляром под вакуумом.

Определение. После отгонки растворителей остаток смывают 5-10 мл гексана и аликвоту вводят в хроматограф. Для анализов желательно использовать стеклянные колонки, потому что в колонках из другого материала возможно разрушение ДДТ. Рабочие параметры: температура колонки 170-200 °С, температура блока ввода пробы 180-210 °С, температура детектора 165-195 °С, Скорость газа - носителя 50-100 мл/мин.

Выход компонентов смеси осуществляется в следующем порядке: линдан, ТХМ-3, ДДЭ, ДДД, ДДТ. Следует так подобрать рабочие параметры, чтобы продолжительность анализа на хроматографе не превышала 30 мин. Качественный анализ проводится путем сравнения времени удерживания полученных пиков со временем удерживания пиков стандартной смеси.

Для проведения количественного анализа необходимо построить калибровочный график по каждому пестициду. Для этого в хроматограф вводят 1 мкл, 2 мкл, 3 мкл и т.д. стандартной смеси. Затем строят график зависимости высот или площадей пиков от количества введенного в хроматограф пестицида. Точность калибровки проверяют не реже 2-3 раз в день, вводя стандартную смесь.

Измерив площадь или высоту пика определяемого вещества, находят по графику количество пестицида. Далее определяют количество пестицида в 1 кг исследуемого продукта по формуле:

,

     
где - количество препарата, мг/кг;

- объем пробы, введенной в хроматограф, мл;

- объем анализируемой пробы продукта, мл;

- количество пестицида в пробе, мкг.

Если смыв проведен 10 мл гексана, дробь умножают на 10 (таблица).

Таблица

     
Полнота определения пестицидов в различных молочных продуктах, %

Сборник методических документов,
необходимых для обеспечения применения
Федерального закона от 12.06.08 N 88-ФЗ
"Технический регламент на молоко
и молочную продукцию". Часть 7. -
М.: Федеральный центр гигиены
и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009