Определение байтекса в молоке и мясе тонкослойной хроматографией
Определение байтекса в молоке и мясе тонкослойной хроматографией
Байтекс - 0,0-диметил-0-(3-метил-4-метилмеркаптофенил)-тиофосфат. Синонимы: Байер S 1752, Байер 29493, фентион, тигувон, энтекс, лебайцид.
Байтекс
Химически чистый препарат - бесцветное масло без запаха с температурой кипения 109 °С при 0,01 мм рт.ст. Относительная молекулярная масса 278.
Технический байтекс (95-98%-ный) - желто-коричневая маслянистая жидкость со слабым характерным запахом; перегоняется при 105 °С и 0,01 мм рт.ст. Байтекс хорошо растворяется в метиловом и этиловом спиртах, эфире, ацетоне, многих углеводородах, а также в хлорированных углеводородах и маслах. В петролейном эфире препарат малорастворим. В воде при комнатной температуре растворимость составляет 54-56 мг/л.
Принцип метода. Метод* основан на экстракции препарата из проб и хроматографировании в тонком слое силикагеля с гипсом. В качестве подвижного растворителя используют смесь петролейного эфира с ацетоном (2:1). Препарат проявляют раствором азотно-кислого серебра, которое, взаимодействуя с фенолятами, образующимися в результате гидролиза байтекса спиртовой щелочью, дает темно-серые пятна на белом фоне.
_________________
* А.П.Родэ и А.А.Непоклонов (ВНИИВС).
Количественное определение байтекса проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен со стандартной шкалой. Чувствительность метода 3 мкг в пробе или 0,3 мг/кг.
Реактивы и растворы
Ацетон х.ч.
Петролейный эфир х.ч.
Хлороформ х.ч.
Уксусная кислота ледяная х.ч.
Едкое кали х.ч.
Этиловый спирт 96°-ный (ректификат).
Метиловый спирт 96°-ный (ректификат).
Бутиловый спирт х.ч.
Серебро азотнокислое х.ч.
Силикагель КСК (100 меш).
Гипс медицинский.
100%-ный байтекс.
1,5 н. раствор KOH в смеси метилового и бутилового спирта (1:1).
1%-ный водный раствор азотнокислого серебра.
Дистиллированная вода.
Приборы и посуда
Хроматографическая камера (стеклянный цилиндрический сосуд с притертой крышкой).
Гомогенизатор для измельчения тканей.
Центрифуга (6-8 тыс. об/мин).
Термостатическая водяная баня.
Конические колбы на 100 мл.
Роторный испаритель.
Делительные воронки на 150 мл.
Фарфоровые чашки для выпаривания.
Пульверизаторы.
Мензурки на 50 и 100 мл.
Пипетки разные.
Микропипетки.
Фильтры бумажные обеззоленные.
Стеклянные пластинки для хроматографии 13х18 см.
Приготовление пластинок
На обезжиренную пластинку 13х18 см наносят слой сорбента. Для приготовления сорбента берут 50 г силикагеля и смешивают с 2,5 г гипса. Смесь заливают 150 мл 5,0%-ной уксусной кислоты и тщательно перемешивают. Две чайных ложки полученной гомогенной массы распределяют по поверхности пластинки ровным слоем. Пластинку подсушивают в горизонтальном положении при комнатной температуре 24 ч, после чего она готова к употреблению.
Ход анализа. Мясо. Пробу нежирного мяса массой 10 г заливают 5 мл ацетона и гомогенизируют 2 мин при 1000 об/мин. Гомогенат помещают в коническую колбу. Четыре раза ополаскивают сосуд, в котором измельчали ткань, порциями ацетона по 5 мл; выливают ацетон в колбу с пробой. Смесь гомогената с ацетоном оставляют при комнатной температуре на 30 мин, затем ее центрифугируют 15 мин при 6-8 тыс. об/мин. Жидкую фазу через бумажный фильтр отфильтровывают в делительную воронку, куда затем наливают 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и 20 мл хлороформа. Содержимое воронки хорошо перемешивают. После полного разделения слоев нижний слой (смесь ацетона с хлороформом) сливают и фильтруют через бумажный фильтр. В делительную воронку наливают еще 10 мл хлороформа и процедуру повторяют. Для обезвоживания экстракта на поверхность фильтра насыпают 5 г сульфата натрия. Экстракт выпаривают при комнатной температуре под тягой, на водяной бане или в роторном испарителе.
Молоко. К пробе (10 мл) добавляют 20 мл ацетона. Дальнейший ход экстракции байтекса такой же, как при экстракции из мяса. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл ацетона, выпаривают растворитель до объема 0,1-0,2 мл и наносят микропипеткой на хроматографическую пластинку. Эту процедуру повторяют 3 раза, нанося ацетоновый смыв в одну и ту же точку. Пластинку помещают в хроматографическую камеру с системой петролейный эфир-ацетон (2:1) и выдерживают, пока растворитель не поднимется на 10 см. Пластинку вынимают из камеры и высушивают в течение часа на воздухе. Для проявления хроматограммы пластинку опрыскивают из пульверизатора 1,5 н. раствором едкого кали в смеси метилового и бутилового спиртов (1:1), а через 15-20 мин опрыскивают 1%-ным водным раствором азотнокислого серебра. Проявление ускоряется, если после опрыскивания азотнокислым серебром пластинку 2 мин подержать над плиткой или другим источником тепла. Байтекс проявляется в виде темно-серых пятен на белом фоне.
При наличии в пробах байтекса 
составляет 0,67-0,72, для оксианалога байтекса составляет 0,24-0,26.
Количественное определение байтекса в исследуемом материале проводят путем сравнения интенсивности окраски и величины пятен со шкалой стандартов. Для приготовления стандартной шкалы готовят растворы байтекса в ацетоне 1:100000, 1:50000, 1:20000, 1:10000, 1:5000. По 0,1 мл каждого разведения наносят на хроматографическую пластинку. После разгонки и проявления получают пятна, соответствующие 1, 2, 5, 10 и 20 мкг байтекса. Пятна измеряют и сравнивают визуально.
Расчет. При вычислении количества байтекса учитывают, что из молока и мяса экстрагируется в среднем 80% препарата. Расчет проводят по формуле:
,
где 
- количество препарата в продукте, мг/кг;
- количество препарата, выделенное из пробы, мкг;
- масса пробы, г;
1,25 - коэффициент экстракции.
Сборник методических документов,
необходимых для обеспечения применения
Федерального закона от 12.06.08 N 88-ФЗ
"Технический регламент на молоко
и молочную продукцию". Часть 7. -
М.: Федеральный центр гигиены
и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009