Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2142-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ВОДЕ, ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ТАБАЧНЫХ ИЗДЕЛИЯХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
Данная методика апробирована и рекомендована в качестве официальной группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Настоящие Методические указания распространяются на определение содержания ДДТ, ДДЭ, ДДД, гексохлорана, альдрина, кельтана, гептахлора, метоксихлора, дактала, тедиона и эфирсульфоната в воде, почве, вине, овощах, фруктах, грибах, зерне, комбикормах, корнеклубнеплодах и зеленых кормах, рыбе, мясе, мясопродуктах, внутренних органах, молоке и молочных продуктах, животном жире, сливочном и растительных маслах, жмыхах, шротах, лузге, меде, сахаре, яйцах и яйцепродуктах, а также в табачных изделиях.
1. Характеристика анализируемых пестицидов
Краткая характеристика препаратов представлена в табл.1.
Таблица 1
N п/п |
Пестицид |
Химическое название |
Эмпирическая формула |
Мол. масса |
Темп., °С |
Растворимость |
||
плавле- |
кип., мм рт.ст. |
в воде |
в орг. растворе |
|||||
1. |
Альдрин |
1,2,3,4,10,10- |
С12Н8Сl6 |
364,92 |
104-105 |
н |
гексан, бензол, ацетон, спирты и др. |
|
2. |
Гексахлоран |
1,2,3,4,5,6- |
С6Н6Сl6 |
290,82 |
||||
3. |
Гексахлор- |
1,2,3,4,5,6- |
С6Сl6 |
264,8 |
231 |
322 |
тр-р |
бензол, спирты, четыреххлорист. углерод, керосин, бензол |
4. |
Гептахлор |
1,4,5,6,7,8-гептахлор- |
С10Н5Сl7 |
373,5 |
95-96 |
117-196 (0,05) |
н |
циклогексан, ксилол, четыреххлор. углерод, керосин, бензол |
5. |
п,п' ДДД |
4,4'-дихлорди- |
С14Н10Сl4 |
320,0 |
112 |
н |
ацетон, бензол, гексан и др. |
|
6. |
п,п' ДДТ |
4,4'-дихлорди- |
С14Н9Сl5 |
354,5 |
108,5-109 |
185 (1) |
0,001 |
ацетон, бензол, гексан, спирты и др. |
7. |
п,п' ДДЭ |
4,4-дихлорди- |
С14Н9Сl4 |
318,0 |
0,014 |
ацетон, гексан, бензол |
||
8. |
Дактал |
Диметилтетра- |
С10Н6О4Сl4 |
332,0 |
156 |
ацетон, гексан, бензол, хлороформ |
||
9. |
Кельтан (Хлорэтанол) Кетан |
4,4'-дихлорди- |
С14Н9ОСl5 |
370,4 |
78,5-79 |
225 |
н |
толуол, хлороформ, серный эфир, гексан, бензол, спирты |
10. |
Метоксихлор |
4,4'-диметокси- |
С16Н15О2Сl3 |
345,65 |
70-85 |
тр-р |
ацетон, четырех- |
|
11. |
Тедион |
4-Хлорфенил- |
C12H6O2Cl4S |
356,07 |
146-147 |
0,02 (56) |
бензол, ксилол, толуол, |
|
12. |
Эфирсульфонат |
4-хлорфенил- |
C12H8Cl2SО3 |
303,06 |
86,5 |
н |
ацетон, дихлорэтан, ксилол, циклогексан, четырех- |
2.1. Принцип метода. Метод основан на хроматографии хлорсодержащих пестицидов в тонком слое окиси алюминия, силикагеля или пластинок "Силуфол" в различных системах подвижных растворителей после экстракции их из исследуемых образцов и очистке экстрактов. Подвижным растворителем служит н-гексан или н-гексан в смеси с ацетоном. Места локализации препаратов обнаруживают после опрыскивания пластинок раствором аммиаката серебра с последующим ультрафиолетовым облучением или после облучения ультрафиолетовым светом пластинок "Силуфол", содержащих о-толидин.
2.2. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 2.
Таблица 2
Диапазон определяемых концентраций 0,005-2,0 мг/кг или мг/л
Анализируемая проба |
Предел обнару- |
Число парал- |
Размах варьи- |
Среднее значение опре- |
Стан- |
Относи- |
Довери- |
Вода |
0,005 |
7 |
20 |
93 |
10 |
10,7 |
7,7 |
Вино |
0,005 |
7 |
25 |
90 |
12 |
13,3 |
9,0 |
Овощи |
0,05 |
7 |
20 |
83 |
12 |
14,4 |
9,0 |
Фрукты |
0,05 |
6 |
20 |
81 |
9 |
11,1 |
7,4 |
Зерно |
0,05 |
7 |
25 |
75 |
10 |
13,3 |
7,5 |
Трава |
0,025 |
10 |
30 |
74 |
12 |
16,2 |
7,6 |
Рыба |
0,05 |
10 |
24 |
83 |
12 |
14,4 |
7,6 |
Мясо |
0,05 |
10 |
30 |
87 |
15 |
17,2 |
9,5 |
Животный жир |
0,04 |
6 |
26 |
82 |
12 |
14,6 |
9,9 |
Молоко, сливки, творог |
0,04 |
13 |
30 |
86 |
16 |
18,6 |
8,9 |
Сливочное масло |
0,05 |
8 |
30 |
83 |
17 |
20,0 |
12,0 |
Сахар |
0,02 |
6 |
6 |
97 |
5 |
5,1 |
4,1 |
Почва |
0,06 |
70 |
9 |
7,9 |
2.3. Реактивы и растворы
Ацетон х.ч., ГОСТ 2603-71
Аммиак водный х.ч., ГОСТ 3760-64
Алюминия окись 2 ст. активности для хроматографии, ч., МРТУ 6-09-5296-68*. Просеивают через сито 100 меш.
________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, не приводятся. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.
Алюминия окись, пропитанная серной кислотой. Две весовые части окиси алюминия (или окиси кремния) помещают в фарфоровую ступку, заливают одной объемной частью серной кислоты и тщательно перемешивают. Смесь готовят непосредственно перед подготовкой колонок для очистки экстрактов из проб шротов, жмыха, лузги
Бензол х.ч., ГОСТ 5955-68
Н-гексан ч., МРТУ 6-09-2937-66
Калий щавелевокислый ч.д.а., ГОСТ 5868-68
Кальций сернокислый ч.д.а., ГОСТ 3210-66. Просушивают 6 часов в сушильном шкафу при 160°С. Просеивают через сито 100 меш.
Кремния окись для люминофоров ч., МРТУ 6-09-4875-67
Натрий сернокислый безводный ч., ГОСТ 4166-66
Натрий углекислый кислый х.ч., ГОСТ 4201-66, 0,5 н. раствор
Натрий хлористый х.ч., ГОСТ 4233-66, насыщенный раствор
Петролейный эфир (темп. кип. 40-70°)
Перекись водорода х.ч. (30% водный раствор), ГОСТ 10929-64
Проявляющие реактивы:
Проявляющий реактив N 1. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; в готовый раствор можно добавить 0,2 мл перекиси водорода. Раствор следует хранить в колбе с притертой пробкой в темном месте в течение 3-х дней. На пластинку 9х12 см расходуется 8-10 мл раствора.
Проявляющий реактив N 2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят объем раствора до 200 мл ацетоном, затем добавляют 6 капель 30-процентной перекиси водорода.
Серебро азотнокислое ч.д.а., ГОСТ 1277-63
Серная кислота ч., ГОСТ 4204-66
Силикагель АСК (Воскресенского химкомбината Московской обл.)
Силикагель КСК, просеянный через сито 100 меш.
Стандартные образцы:
ДДТ, ДДД, ДДЭ, альдрин, изомеры ГХЦГ, гептахлор, метоксихлор, кельтан, эфирсульфонат, дактал, тедион х.ч.
Стандартные растворы: 10 мг соответствующего пестицида растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане и доводят до метки этим растворителем. Стандартные растворы необходимо хранить в стеклянной посуде с притертыми пробками в холодильнике.
Стеклянная вата, очищенная конц. серной кислотой, промытая дистиллированной водой и высушенная
о-Толидин ч., МРТУ 6-09-6337-69, 1% раствор в ацетоне
2-феноксиэтанол
Этиловый спирт, ректификат, ТУ 19-11-39-69
Хлороформ х.ч., ГОСТ 200-15-74*
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 20015-74. - Примечание изготовителя базы данных.
Четыреххлористый углерод х.ч., ГОСТ 20228-74*
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 20288-74. - Примечание изготовителя базы данных.
Этиловый эфир (для наркоза), Фармакопея СССР
Натрий сернокислый, 2% водный раствор
Натрий сернокислый, насыщенный раствор
2.4. Приборы и посуда
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76
Вакуумно-ротационный испаритель, ИР ТУ 25-11-310-69 или прибор для отгонки растворителей, МРТУ 25-11-67-67
Воронки химические, диам. 6 см, ГОСТ 86-13-64*
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.
Воронки делительные, емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10054-75
Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-69
Гомогенизатор или измельчитель тканей
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70
Камера для хроматографирования, размером 150x200, 105х165 мм, ГОСТ 10565-63
Колбы Бунзена, ТУ 25-11-135-69
Колбы мерные, емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74
Колбы нш, емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63
Колбы круглодонные нш, емкостью 150, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63
Микропипетки, ГОСТ 1770-74 (для нанесения стандартных растворов)
Пипетки или шприцы для нанесения проб
Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74
Прибор для встряхивания, МРТУ 2451-64
Пластинки стеклянные 9x12, 13х18 см
Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок
Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0,147 мм)
Стеклянные хроматографические колонки (диаметр - высота), 20х400, 15х150
Ртутно-кварцевая лампа
Цилиндры мерные емкостью 25, 50, 100, 250, 500 мл, ГОСТ 1770-74
Чашки выпарительные N 3, N 1, ГОСТ 9147-69
Тщательно промытую хромовой смесью, раствором соды, дистиллированной водой и высушенную пластинку протирают этиловым спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой. Массу готовят следующим образом:
а) 50 г просеянной через сито 100 меш. окиси алюминия смешивают в фарфоровой ступке с 5 г сернокислого кальция, прибавляют 75 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до образования однородной массы. На пластинку 9х12 см наносят 10 г сорбционной массы (на пластинку 13х18 см - 20 г) и, покачивая, равномерно распределяют по всей пластинке. Пластинки сушат при комнатной температуре 18-20 часов, можно сушить их 20 минут при комнатной температуре, а затем 45 минут в сушильном шкафу при температуре 110°С.
б) 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100 меш., смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до однородной массы. Наносят на пластинки и сушат, как указано выше. Порция рассчитана на 10 пластинок.
Если пластинки с тонким слоем силикагеля темнеют после облучения УФ-светом, силикагель перед употреблением следует очистить от примесей. Для этого силикагель заливают на 18-20 часов разбавленной соляной кислотой (1:1), кислоту сливают, промывают силикагель водой и кипятят в круглодонной колбе 2-3 часа с разбавленной азотной кислотой (1:1), промывают проточной водопроводной, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу 4-6 часов при температуре 130°. Силикагель дробят и просеивают через сито 100 меш.
Пластинки для хроматографии "Силуфол" UV-254 производства ЧССР перед использованием импрегнируют о-толидином. Для этого каждую пластинку опускают на 0,5 см в 0,1% раствор о-толидина в ацетоне, налитый в камеру для хроматографирования. После того как фронт растворителя поднимется до верхнего края пластинки, ее вынимают и высушивают на воздухе, избегая прямого солнечного света. После этого пластинки готовы к употреблению. Пластинки, импрегнированные о-толидином, хранят в эксикаторе. Используют при анализе кормов.
Пластинки "Силуфол" UV-254 производства ЧССР предварительно промывают дистиллированной водой в хроматографической камере, высушивают на воздухе и непосредственно перед использованием активизируют в сушильном шкафу при температуре 65° в течение 4 минут.
Подготовка хроматографических колонок для очистки экстрактов
Хроматографическая колонка для очистки от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки (размером 20х400 мм) помещают стекловату или 500 мг обезжиренной ваты. Затем засыпают в колонку силикагель АСК (75 мл для очистки экстрактов из проб свиного жира и 70 мл для всех остальных проб) и уплотняют силикагель постукиванием по колонке. Колонку промывают 50 мл н-гексана или петролейного эфира, и прошедший через нее растворитель отбрасывают. После этого колонка готова для хроматографической очистки экстрактов из проб рыбы, мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, меда, яиц и т.д.
Хроматографическая колонка для очистки экстрактов из проб шротов (необогащенных липидами) и лузги.
Хроматографическую колонку заполняют на высоту 1 см стеклянной ватой, затем в колонку вносят просеянную окись алюминия (I) слоем 2,5 см или окись кремния - 3,5 см. Далее засыпают, не утрамбовывая, комочки окиси алюминия (кремния), пропитанные серной кислотой, высота слоя (II) 2,5 см. Каждый слой последовательно промывают гексаном (всего 20-30 мл).
Для анализа жмыхов и шротов, обогащенных липидами, слои окиси алюминия следует увеличить до 5 см (I) и 3 см (II) соответственно, в случае использования окиси кремния - 6 см (I) и 3 см (II).
2.5. Проведение определения
Вода, вино. 200 мл пробы помещают в делительную воронку и экстрагируют пестициды, встряхивая в течение 3-х минут н-гексаном или петролейным эфиром тремя порциями по 30 мл или диэтиловым эфиром тремя порциями по 50 мл. В объединенные экстракты насыпают 10 г безводного сернокислого натрия или фильтруют через воронку, заполненную на 2/3 сернокислым натрием. Экстракты переносят в прибор для отгонки растворителей и отгоняют растворитель до объема 0,2-0,3 мл. В случае необходимости экстракт чистят серной кислотой.
Овощи, фрукты. 20 г измельченной пробы помещают в колбу с притертой пробкой и проводят экстрагирование пестицидов трижды в течение 15 минут на аппарате для встряхивания н-гексаном или петролейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием, переносят в прибор для отгонки растворителей, отгоняют растворитель до объема 0,2-0,3 мл и наносят на пластинку.
Зерно, грибы. Из измельченных проб отбирают 20 г зерна, 50 г сырых или 10 г сухих грибов и помещают в колбы с притертыми пробками. Экстракцию пестицидов проводят трижды на приборе для встряхивания н-гексаном или петролейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, прибавляют 10 мл насыщенного раствора безводного сернокислого натрия в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку до тех пор, пока кислота не станет бесцветной. Экстракт промывают дистиллированной водой, сушат безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель.
Яблоки, капуста, трава, сено. 20 г измельченных яблок, 20 г капусты, 40 г травы и 20 г сена заливают 100 мл ацетона в колбе с притертой пробкой. Встряхивают 2-3 минуты, прибавляют 20 мл дистиллированной воды и охлаждают на льду 30 минут. Экстракт сливают и фильтруют холодным, экстракцию повторяют. Из объединенных водно-ацетоновых экстрактов отгоняют ацетон, а из водного остатка экстрагируют препараты н-гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 10 минут. Гексановые экстракты очищают серной кислотой, насыщенной безводным сернокислым натрием. Сушат безводным сернокислым натрием. Отгоняют растворитель до небольшого объема и наносят на пластинку. Если очистка неполная (после испарения растворителя на колбе остается белый налет), экстракт испаряют досуха, остаток смывают холодным ацетоном 3 раза порциями по 0,2 мл и сразу наносят на пластинку.
Комбикорма. Для исследования берут навеску 40 г, увлажняют ее в колбе 60 мл дистиллированной воды. Увлажненную навеску оставляют на ночь в колбе, закрытой пробкой. Экстракцию пестицидов проводят дважды 50-100 мл смеси гексан-ацетон 1:1 при встряхивании в течение 2 часов. Экстракты объединяют в делительной воронке на 500 мл, прибавляют дважды по 50 мл дистиллированной воды и, после разделения слоев, нижний водный слой сливают в другую делительную воронку и экстрагируют пестициды 40 мл гексана. Водный слой сливают. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием. Экстракты упаривают на ротационном испарителе до объема 20-30 мл или досуха, растворяя затем сухой остаток в 20-30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракт переносят в делительную воронку и производят очистку серной кислотой, как описано выше.
Шрот, лузга, жмых. Навески: 15 г обогащенного липидами шрота или жмыха; 20 г не обогащенного липидами шрота или лузги делят на равные части и помещают в колбы емкостью 100-250 мл с притертыми пробками, заливают гексаном (три объема гексана на одну весовую часть шрота), встряхивают на приборе для встряхивания 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку Бюхнера, не перенося осадок на воронку. В колбу повторно заливают указанное количество гексана, встряхивают 30 минут, фильтруют, количественно переносят осадок на воронку Бюхнера с помощью 30 мл гексана (3 раза по 10 мл). Полученный экстракт выпаривают до 30 мл на ротационном испарителе или в токе воздуха при температуре не выше 40°, остаток делят на две равные части и помещают в морозильную камеру холодильника на 1 час (не менее). Каждую часть пропускают через отдельную колонку с окисью алюминия со скоростью 2 мл/минуту, промывают колбу и колонку 50 мл охлажденной смеси этилового эфира с гексаном (15:85). Эту операцию необходимо проводить без перерыва, не оставляя на следующий день. Очищенные экстракты объединяют и упаривают до объема 1 мл. Остаток из колбы переносят количественно микропипеткой с помощью резиновой груши в пробирку на 1 мл, колбу и микропипетку 2-3 раза промывают небольшим количеством гексана (всего 0,3-0,5 мл), сливая его в ту же пробирку. Затем осторожно выпаривают гексан из пробирки на водяной бане при температуре 50° почти досуха (конечный объем приблизительно 2-3 капли). Если общий объем экстракта и промывной жидкости превышает 1 мл, то сначала выпаривают экстракт, постепенно прибавляя к нему промывную жидкость. При наличии в упаренном экстракте белого мазеобразного осадка в пробирку добавляют 5-6 капель гексана и помещают ее на 15-20 минут в морозильную камеру холодильника, затем деканируют дважды таким же количеством гексана и снова упаривают до конечного объема 2-3 капли.
Параллельно с исследуемыми образцами готовят два модельных экстракта. Каждый экстракт получают из одного грамма шрота, не содержащего пестицидов (соотношение сухого вещества и пестицида то же, что и в исследуемых образцах). В один из экстрактов перед очисткой на колонках вносят микрошприцем (микропипеткой) определяемые пестициды в количестве 3 мкг, в другой - 0,75 мкг. Упаренные исследуемые и модельные экстракты с помощью микропипетки или микрошприца количественно наносят на пластинку, трижды смывая пробирку небольшим количеством гексана.
Рыба, мясо и мясопродукты. Мясо, мясопродукты пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи, внутренних органов и тоже пропускают через мясорубку. 20 г пробы перемешивают с безводным сернокислым натрием и помещают в колбу с притертой пробкой. Пестициды экстрагируют дважды смесью гексан-ацетон или петролейный эфир-ацетон в соотношении 1:1 порциями по 50 мл в течение 1,5 часов при встряхивании. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием, затем растворитель отгоняют, сухой остаток растворяют в 20 мл н-гексана и вносят его в колонку с силикагелем АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25-30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250-300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью груши. Элюат отгоняют до объема 0,1 мл и наносят на хроматографическую пластинку.
В том случае, если пробы мяса или рыбы содержат большое количество жира, после испарения первого экстрагента (смеси ацетона с гексаном) и растворения сухого остатка в гексане следует провести очистку гексанового экстракта серной кислотой, а затем колоночную очистку, как описано выше.
Животный жир, яйца, яичный порошок. Жир измельчают на мясорубке, яичный порошок тщательно перемешивают, яйца - отделяют желток от белка, взвешивают желток и белок, а для анализа берут только желток. Конечный результат о содержании хлорорганических пестицидов в яйце приводят на все яйцо. Желток тщательно перемешивают.
25 г подготовленного образца заливают 50 мл ацетона, перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до закипания растворителя. Колбу охлаждают, добавляют в нее 10 мл охлажденного 2% раствора сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 45 минут на ледяной бане. Затем сливают ацетоновый слой в круглодонную колбу через слой обезжиренной ваты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют еще два раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на ротационном испарителе или в приборе для отгонки растворителей (температура бани не более 70°±2°) и трижды экстрагируют петролейным эфиром порциями 20, 10 и 10 мл. Продолжительность первой экстракции 1 час, последующих - 15 минут. Петролейный эфир переносят в делительную воронку с 40 мл 2% водного раствора сернокислого натрия, перемешивают содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают. Для улучшения разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще два раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрия, споласкивают делительную воронку дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушенный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят объем раствора петролейным эфиром до 30 мл. Далее наносят 30 мл экстракта в колонку с силикагелем АСК, как указано выше. Для проб свиного жира насыпают 75 мл силикагеля АСК, для всех остальных проб - 70 мл. Очистку экстрактов проводят, как описано для проб мяса. Элюат собирают в круглодонную колбу на 150 мл, растворитель упаривают до объема нескольких капель и наносят на хроматографическую пластинку.
Мед. 30 г меда смешивают с 3 г безводного сернокислого натрия и трижды экстрагируют пестициды гексаном порциями по 30 мл каждый раз по 15 минут, тщательно растирая мед стеклянной палочкой в узком химическом стакане. Экстракты объединяют и отгоняют гексан до объема 30 мл или до меньшего объема, далее доводя экстракт до 30 мл гексаном. 30 мл экстракта вносят в хроматографическую колонку с силикагелем АСК и проводят очистку экстракта и испарение растворителя, как описано выше.
Сахар. Из навески 50 г сахара, предварительно растворенного в воде, пестициды экстрагируют в делительной воронке на 250 мл н-гексаном. Экстракцию пестицидов проводят трижды по 50, 25 и 25 мл растворителя каждый раз встряхивая по 5 минут. Объединенные гексановые экстракты очищают от коэкстрактивных веществ (красящие, аминокислоты, липиды) сернокислотным способом.
Молоко и молочные продукты. Для подготовки проб можно использовать один из приведенных способов.
Первый способ. Сливки, сметана, молоко и др. цельномолочные продукты. Для анализа берут 20 г сливок и сметаны, предварительно разведенных равным объемом дистиллированной воды, 50 мл молока, кефира и т.п., прибавляют концентрированную серную кислоту (30-40 мл) до полного почернения пробы. Охлажденный до 10-15°, раствор переносят в делительную воронку и экстрагируют препараты гексаном 2 раза порциями по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты, затем оставляют ее на 30 минут до полного разделения слоев. Если образуется эмульсия, прибавляют 1-2 мл этилового спирта. К объединенным экстрактам в делительной воронке прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты, насыщенной сернокислым натрием, и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку продолжают до получения бесцветной серной кислоты.
Творог, сыр. 50 г творога или 10 г измельченного на терке сыра заливают 40 мл гексана или петролейного эфира, непрерывно встряхивают 2-3 минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты в делительной воронке очищают серной кислотой, как указано выше.
Второй способ. Молоко, кефир, простокваша, кумыс и другие цельномолочные продукты. 25 мл продукта помещают в делительную воронку на 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 2 минуты. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до полного разделения слоев. Верхнюю фазу отбрасывают, а нижнюю выливают в круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30 мл гексана.
Сгущенное молоко, 10-20% сливки. К 10 г продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и выливают в делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона, встряхивают 2 минуты, приливают 60 мл хлороформа, встряхивают 2-3 минуты и оставляют до разделения фаз. Далее поступают, как при определении пестицидов в молоке.
Сгущенные молочные продукты. 10 г продукта помещают в стаканчик, заливают 10 мл воды с температурой 45-50°С, перемешивают и переносят в делительную воронку на 150 мл, добавляют 5 мл щавелевокислого калия. Содержимое воронки перемешивают, приливают 80 мл ацетона и встряхивают 2-3 минуты. Добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5-7 минут. После разделения фаз нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворители отгоняют, а сухой остаток растворяют в 30 мл петролейного эфира.
Сухие молочные продукты. 3 г сухих молочных продуктов (сливок 2 г) высыпают в стаканчик, приливают 15 мл дистиллированной воды с температурой 40-45°С, размешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3-5 минут, приливают 100 мл хлороформа, встряхивают 5 минут и оставляют на 3-5 минут (до разделения фаз). Нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворитель отгоняют, а остаток смывают 30 мл гексана.
Сметана, 30-40% сливки. 5 г продукта отвешивают в стаканчик, приливают 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл ацетона, смывы переносят в делительную воронку, которую встряхивают 2-3 минуты, добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют на несколько минут до разделения фаз, нижнюю фазу сливают в колбу для отгонки растворителей, растворитель отгоняют, а остаток смывают 30 мл гексана.
Творог, сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку на 250-300 мл. Прибавляют 80 мл ацетона, встряхивают 2 минуты, приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей, растворив остаток в 30 мл гексана.
Далее проводят очистку экстрактов из проб молока и молочных продуктов от молочного жира, подготовленных по второму способу. Для этого 30 мл экстракта наносят в колонку с 70 мл силикагеля АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25-30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу на 250-300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом.
Сливочное масло. 20 г сливочного масла растапливают на водяной бане в круглодонной колбе, прибавляют 50 мл ацетона, тщательно перемешивают до растворения жира, прибавляют 10 мл ледяной дистиллированной воды и охлаждают на льду до затвердевания жира (примерно 30 минут). Сливают ацетоновый экстракт, и процедуру повторяют еще 2 раза. Из объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане. Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 5 минут. Объединенные гексановые экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым натрием. Очищенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием и упаривают.
Почва. К навескам воздушно-сухой почвы (10 г), помещенным в конические колбы емкостью 250 мл, приливают 10 мл 1-процентного водного раствора хлористого аммония и оставляют на сутки закрытыми. Затем приливают смесь 30 мл ацетона и 30 мл гексана и встряхивают колбы в течение часа на встряхивающем устройстве. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки. После центрифугирования жидкую часть сливают в конические колбы, почву с помощью 10 мл 1-процентного раствора хлористого аммония и 30 мл ацетона переносят в исходные конические колбы, добавляют 30 мл гексана и проводят экстракцию еще в течение 30 минут. Затем экстракты объединяют. К объединенным экстрактам в делительной воронке приливают 180 мл дистиллированной воды, осторожно встряхивают в течение 5-7 минут, дают жидкостям расслоиться и нижний водный слой сливают в коническую колбу. Гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия (столовая ложка или 30-40 г сульфата натрия).
Из водно-ацетонового слоя экстракцию пестицидов проводят еще дважды 15 и 10 мл гексана, который затем сушат через тот же сульфат натрия. Гексановые экстракты объединяют.
Концентрирование экстрактов проводят либо на ротационно-вакуумном испарителе, либо при температуре бани не более 40°С и времени отгонки 9-11 минут, либо из колбочек с г-образным отводом при температуре водяной бани 72-75°С.
Очистку сконцентрированных гексановых экстрактов из проб почв проводят серной кислотой, как описано выше для других проб, и испаряют растворитель.
Табак и табачные изделия. 5 г табака помещают в стеклянный стакан на 500 мл, заливают 50 мл концентрированной серной кислоты и стеклянной палочкой тщательно размешивают до полного равномерного обугливания пробы. Спустя 10-15 минут в колбу добавляют 25 мл гексана, тщательно размешивают содержимое и прибавляют 20 мл четыреххлористого углерода. Экстракцию пестицидов из пробы проводят в течение 15 минут трижды, после чего экстракт последовательно переносят в делительную воронку для однократной или двукратной дополнительной очистки серной кислотой.
На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Остаток экстракта в колбочке смывают тремя порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие 10, 5, 1 мкг исследуемых препаратов (или другие количества, близкие к определяемым концентрациям).
Пластинки с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 минут до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель. При использовании пластинок с тонким слоем окиси алюминия или силикагеля в качестве подвижного растворителя применяют н-гексан или смесь гексана с ацетоном в соотношении 6:1, для препаратов, у которых величина в гексане ниже 0,3. При использовании пластинок "Силуфол" подвижный растворитель - 1% раствор ацетона в гексане, а пластинок "Силуфол", импрегнированных о-толидином, гексан с диэтиловым эфиром в соотношении 49:1. Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.
После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают действию УФ света в течение 10-15 минут (лампа ПРК-4). Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.
При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета.
При использовании для анализа пластинок "Силуфол", импрегнированных о-толидином, их непосредственно после хроматографирования подвергают УФ-облучению в течение нескольких минут. При наличии хлорорганических пестицидов в этом случае появляются пятна сине-голубого цвета.
Количественное определение осуществляют сравнением площадей пятен пробы и стандартных растворов. Между количеством препарата в пробе, не превышающим 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.
2.6. Обработка результатов анализа
Количество препарата в пробе вычисляют по формуле:
,
где: - содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л;
- содержание препарата в стандартном растворе, мкг;
- площадь пятна стандартного раствора, мм;
- площадь пятна пробы, мм;
- масса или объем исследуемой пробы, г или мл.
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и хлорорганическими пестицидами.
Таблица 3
Пестицид |
Подвижный растворитель |
Величина |
|
на окиси алюминия |
на силикагеле |
||
Гексахлорбензол |
Гексан |
0,9 |
- |
Альдрин |
Гексан |
0,83 |
0,68 |
ДДЭ |
-"- |
0,78 |
0,66 |
ДДЭ |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,87 |
- |
Гептахлор |
Гексан |
0,76 |
0,65 |
2,4-ДДТ |
-"- |
0,67 |
0,54 |
4,4'-ДДТ |
-"- |
0,61 |
0,50 |
4,4'-ДДТ |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,75 |
- |
Линдан |
Гексан |
0,34 |
0,20 |
ДДД |
-"- |
0,30 |
0,40 |
ДДД |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,62 |
- |
Метоксихлор |
Гексан |
0,15 |
- |
Метоксихлор |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,60 |
- |
Кельтан |
Гексан |
0,05 |
- |
Кельтан |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,40 |
- |
Кельтан |
Бензол |
0,44 |
- |
Тедион |
Гексан |
0,03 |
- |
Тедион |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,55 |
- |
Эфирсульфонат |
Гексан |
0,* |
- |
Эфирсульфонат |
Гексан + ацетон (6:1) |
0,45 |
- |
Дактал |
То же (2:1) |
0,9 |
- |
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.
В настоящих Методических указаниях обобщены следующие методики определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов в пищевых продуктах:
1. |
М.А.Клисенко, З.Ф.Юркова (ВНИИГИНТОКС) |
Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД, альдрина, дильдрина, гептахлора, метоксихлора, эфирсульфоната и др. ядохимикатов в воде, продуктах питания и биологических средах хроматографией в тонком слое. Утвержден 30.07.1973, N 1112-73. |
2. |
А.Б.Белова, Л.В.Новикова, Н.И.Шадрина (ВНИИ жиров) |
Определение ДДТ, ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола в обогащенных и необогащенных липидами хлопковых шротах. Утвержд. 30.07.1973, N 1112-73. Там же |
3. |
Э.И.Бабкина, Ц.И.Бобовникова, В.В.Егоров, Г.В.Миронюк |
Методические указания по контролю загрязнения почв*. Утв. 12.10.1977, N 1766. Гидрометеоиздат, 1977 |
________________ * Документ не приводится. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных. |
||
4. |
А.И.Шумкова, И.Н.Карпова, С.А.Ликунова, Л.Д.Рузанкова (ВНИИМП) |
Определение хлорорганических пестицидов в животных жирах, мясе, яйцах и продуктах их переработки хроматографией в тонком слое. |
5. |
Л.Ф.Васьковская, А.Л.Бурштейн (ВНИИГИНТОКС) |
Методы определения ДДТ, его метаболитов и ГХЦГ в табачных изделиях способом хроматографии в тонком слое*. Утв. 22.09.1975, N 1350-75. Там же |
________________ * Документ не приводится. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных. |
||
6. |
В.Н.Полякова, Г.А.Трондина, Р.Д.Петухов (ВИЭВ) |
Определение ДДТ, ДДД, ДДЭ и гамма-изомера ГХЦГ в мясе, рыбе, органах и тканях животных, комбикормах, меде и воде методом тонкослойной хроматографии. Справочная книга по ветеринарной токсикологии, "Колос", 1976 |
С введением в действие настоящих Методических указаний считать утратившими силу "Методы определения гептахлора в растениях методом тонкослойной хроматографии" и "Метод определения ДДТ, ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола в хлопковых шротах, обогащенных и необогащенных липидами", утвержденные зам. Главного санитарного врача СССР в 1971, а также "Методическое письмо об определении ДДТ, гамма-ГХЦГ, ДДД, альдрина, гептахлора и некоторых других хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания и биологических средах методом хроматографии в тонком слое", утвержденное заместителем Главного санитарного врача СССР в 1968 г.