Методические указания по определению сульфидофоса в мясе, молоке и кормах методом тонкослойной хроматографии

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении сульфидофоса из проб исследуемых объектов органическими растворителями, очистке и концентрирования экстрактов с последующим хроматографическим разделением на тонком слое сорбента и проявлением. Идентификацию препарата проводят по величине , соответствующих стандартов, а количественное определение - путем измерения площадей пятен пробы и стандартов, учитывая визуально интенсивность их окраски.

2.1.2. Избирательность метода

Определению сульфидофоса не мешают пестициды, применяемые в настоящее время в сельском хозяйстве.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Сульфидофос определительных концентраций 0,05-1 мг/кг. Предел обнаружения 0,5 мкг в анализируемой пробе, что соответствует 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств составляет в органах и тканях 90%, в кормах 80%; число параллельных определений 5.

2.4.1. Экстракция и очистка

Ткани животных. Исследуемые пробы мышц, печени, почек, сердца, легких и др. весом 10 г тщательно измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10-15 г сернокислого безводного натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформом при комнатной температуре в течение одного часа.

Затем экстракт фильтруют через смоченный бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20%-ном спиртоводном растворе. Экстракт переносят в делительную воронку, сюда же добавляют 25 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа. Осторожно смесь взбалтывают в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 0,5 мл ацетона и хроматографируют.

Молоко. Пробы молока (10 мл) переносят в склянки, добавляют 30 мл ацетона и взбалтывают в течение 2-х минут. Затем экстракт фильтруют через вату в фарфоровую чашку, добавляют 70 мл дистиллированной воды и ставят в морозильную камеру холодильника на 1 час. После чего экстракт через обезжиренный слой ваты фильтруют в делительную воронку и экстрагируют с 30 мл хлороформа в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20%-ном спиртоводном растворе. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.

Зеленые растения (клевер, трава и т.д.). Пробы весом 5 г измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 г безводного сернокислого натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформа при комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный хлороформом бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 20%-ном спиртоводном растворе, перемешивая стеклянной палочкой. Экстракт фильтруют через смоченный спиртоводным раствором ваты в делительную воронку. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.

2.4.2. Хроматографирование. Анализируемый экстракт наносят при помощи микропипетки в одну точку на расстоянии 1,5-2 см от края пластинки так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартный раствор, содержащий 0,5, 1 и 5 мкг препарата. Пластинки с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, в которую налита смесь н-гексана и ацетона в соотношении 20:80. Край пластинки с нанесенными растворами должен быть погружен в растворитель не более чем на 0,5 см. Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется на высоту 10 см. После чего ее вынимают, отмечают фронт растворителя, подсушивают на воздухе и опрыскивают сначала смесью растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра. Затем пластинки опрыскивают 2%-ным раствором лимонной кислоты. В присутствии сульфидофоса сразу же после опрыскивания на желтом фоне сорбента появляются ярко-синие пятна в зависимости от концентрации препарата. Чувствительность метода составляет 0,05 мг/кг - сульфидофоса равна 0,5. Точность метода в зависимости от объекта составляет 80-90±10%.