Методические указания по определению лассо в почве, зеленой массе кукурузы и рапсовом масле методом тонкослойной хроматографии

Краткая характеристика препарата. Лассо--метоксиметил-2,6-ди(этил)хлорацетанилид. Брутто формула CHClNO. Молекулярная масса 269,8. Общепринятое название алахлор. Химически чистое действующее вещество представляет собой кристаллический порошок белого или кремового цвета. Т.пл. 39,5-41,5 °С, т.кип. 100 °С (2,7 Па). Давление пара 2,9 мПа (25 °С). Растворимость в воде 242 мг/л (25 °С). Хорошо растворим в ацетоне, бензоле, этилацетате, плохо - в гептане. Разрушается при 105 °С. Стабилен под действием УФ-облучения. Гидролизуется под действием сильных кислот и щелочей. ПДК в воде водоемов санитарно-бытового водопользования 0,1 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на выделении лассо из почвы и зеленой массы кукурузы ацетоном, а из рапсового масла - смесью ацетонитрила с водой. При последующем гидролизе в кислой, а затем щелочной средах образуется 2,6-диэтиланилин, который перегоняется с водяным паром из щелочной среды. Количественное определение проводят методом ТСХ с использованием реакции азосочетания с 1-нафтолом.

Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество 1 мкг. Нижний предел определения (мг/кг): в почве - 0,005, в зеленой массе кукурузы - 0,01, в масле - 0,04. Доверительный интервал среднего (при 0,95, 5) составляет: в почве - 89,5±2,4%, в зеленой массе кукурузы - 85±4, в масле - 74,3±3,9%.

Избирательность метода. Метод специфичен в присутствии других препаратов группы ацетанилидов (рамрода, дуала, ацетала).

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Ацетонитрил ч. -Гексан ч. Кислота серная ч. Гидроксид натрия х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Нитрит натрия х.ч. 1-Нафтол ч.д.а. Кислота хлороводородная х.ч. Серная кислота, 12 н. и 2 н. раствор. Гидроксид натрия, 50%-ный раствор. Стандартные растворы алахлора и 2,6-диэтиланилина в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл.

Проявляющие реагенты: N 1 - 1 г нитрита натрия растворяют в смеси 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты; N 2 - 2,8 г КОН и 0,1 г 1-нафтола растворяют в 50 мл дистиллированной воды.

Приборы и посуда. Прибор для гидролиза и перегонки с водяным паром (рис.5). Ротационный испаритель. Хроматографическая стеклянная камера. Камера для опрыскивания. Пульверизатор. Микропипетки на 0,1-0,2 мл. Колбы: конические на 100 мл, грушевидные. Аппарат для встряхивания. Воронки делительные на 500 мл. Центрифуга лабораторная. Пластинки "Силуфол" размером 15х15 см.

Отбор проб. Для анализа отбирают среднюю пробу почвы (100 г) и зеленой массы кукурузы (50 г). Предварительная очистка масла проводится встряхиванием 100 г средней пробы в делительной воронке с 200 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия в течение 10-15 мин. После расслаивания нижний слой отделяют, а верхний центрифугируют при 10 тыс.об/мин в течение 20-30 мин; 25 г отделившегося масла используют для дальнейшего анализа.

Ход анализа. Экстракция. Анализируемые навески почвы и зеленой массы кукурузы помещают в конические колбы на 500 мл, заливают их 200 мл ацетона и ставят на аппарат для встряхивания на 2 ч. После встряхивания пробы отфильтровывают через бумажный складчатый фильтр, предварительно смоченный ацетоном. Остаток в колбах и на фильтре дважды промывают ацетоном порциями по 50 мл. Объединенный ацетоновый экстракт помещают в колбу и отгоняют ацетон на ротационном испарителе при температуре 40 °С до объема 2-3 мл.

К навеске рапсового масла (25 г) добавляют 75 мл смеси ацетонитрил - вода (9:1) и встряхивают в течение 10-15 мин. Содержимое колбы количественно переносят в центрифужные пробирки и центифугируют в течение 20-30 мин при 10 тыс.об/мин. Отделяют нижний слой в круглодонную колбу, а к верхнему прибавляют 50 мл смеси ацетонитрил - вода и повторяют экстракцию еще дважды. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С.

Гидролитическое расщепление. Колбу с сухим остатком после предыдущих операций присоединяют к прибору для гидролиза и перегонки с водяным паром. В приемную колбу прибавляют 10 мл 12 н. серной кислоты. Конец переходника не должен быть опущен в кислоту. В воронку переходника приливают 25 мл 2 н. серной кислоты. Включают воду через оба холодильника. Кислоту из воронки медленно приливают в колбу с экстрактом. Затем включают нагрев и кипятят пробу в течение 30 мин. После этого нагрев отключают и пробу охлаждают при комнатной температуре в течение 20-30 мин. Через воронку переходника прибавляют 50 мл 50%-ного едкого натра. При добавлении щелочи раствор следует подавать по каплям, исключая закипание пробы. При завершении подачи щелочи включают нагрев и выдерживают раствор при кипении в течение 30 мин. Воду от холодильника отключают по окончании кипячения и проводят перегонку с водяным паром, собирая 50 мл дистиллята (общий объем 60 мл).

Дистиллят охлаждают при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем экстрагируют гексаном трижды порциями по 30 мл. Гексановые фракции отбрасывают. Доводят pH водного слоя до щелочной реакции с помощью 50%-ного раствора гидроксида натрия. Смесь охлаждают на льду в течение 15 мин и выдерживают при комнатной температуре еще 15 мин. Из охлажденной смеси экстрагируют 2,6-диэтиланилин гексаном трижды порциями по 5 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе до объема 0,1-0,3 мл.

Хроматографирование. Остаток после отгона гексана наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" на расстоянии 1,5-2 см от нижнего края. Стенки колбочки тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в то же стартовое пятно. Справа и слева от пятна пробы наносят стандартные растворы 2,6-диэтиланилина. Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан - ацетон (2:1). После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают последовательно реактивом N 1 и после высушивания на воздухе реактивом N 2.

2,6-Диэтиланилин проявляется в виде оранжево-красных пятен с величиной 0,6.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площадей пятен проб и стандартных растворов. Содержание препарата в анализирумой пробе (, мг/кг) рассчитывают по формуле

,

где - количество 2,6-диэтиланилина, нанесенного из стандартного раствора, мкг; , - площади пятна соответственно стандартного раствора и пробы, мм; - навеска пробы, г; 0,553 - коэффициент пересчета на лассо.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности, рекомендуемые при работе с пестицидами и химическими реактивами.